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液相色譜常見問題和解決方法(上)

更新時(shí)間:2023-05-18 點(diǎn)擊次數(shù):1210
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做HPLC分析時(shí),系統(tǒng)無壓力

原因何在?如何解決?

1)流動相粘度過高、被污染,建議選擇合適的流動相和比例,重新配置,用0.45微米濾膜進(jìn)行過濾。

2)流動相內(nèi)的緩沖鹽引起單向閥堵塞,將流速設(shè)定在5mL/min,擰松排氣閥并purge。

3)泵內(nèi)有氣體,將流速設(shè)定在5mL/min,擰松排氣閥并purge。

4)高壓密封墊變形,建議更換新的高壓密封墊。




做HPLC分析時(shí),柱壓不穩(wěn)定

為什么?如何解決?

1)泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,對溶劑進(jìn)行脫氣處理。

2)比例閥失效,更換比例閥即可。

3)泵密封墊損壞,更換密封墊即可。

4)溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,必要時(shí)改變脫氣方法。

5)系統(tǒng)檢漏,找出漏點(diǎn),密封即可。

6)梯度洗脫,這時(shí)壓力波動是正常的。




HPLC分析測試時(shí)柱壓過高

為什么?

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因:

1)拆去保護(hù)預(yù)柱,看柱壓是否還高,否則是保護(hù)柱的問題,若柱壓仍高,再檢查。

2)把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查。

3)將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上,用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,(此時(shí)不要連接檢測器,以防固體顆粒進(jìn)入流動池)。這時(shí),如果柱壓仍不下降,再檢查。只用于使用過的柱子。

4)更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請與廠商聯(lián)系。一般情況下,在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

 5)進(jìn)樣器堵塞,用注射器抽取適量純凈水(多于定量環(huán)體積),注入進(jìn)樣口,從廢液瓶流出,重復(fù)5次。




為何出現(xiàn)不規(guī)則峰形

如平頭峰,分叉峰,拖尾峰和伸舌峰等?

平頭峰:

1)檢測池污染,清洗檢測池。

2)紫外燈性能極限或故障,更換性能更強(qiáng)的紫外燈。

3)進(jìn)樣量過大,減少進(jìn)樣量。

分叉峰:

1)保護(hù)柱被污染,更換新的保護(hù)柱。

2)色譜柱被污染,對色譜柱沖洗過夜。

3)進(jìn)樣閥被污染,用注射器抽取適量純凈水(多于定量環(huán)體積),注入進(jìn)樣口,從廢液瓶流出,重復(fù)5次。

4)檢測池被污染,清洗檢測池。

5)溶劑選擇不合理,合理選擇溶劑。

6)進(jìn)樣量過大,減少進(jìn)樣量。

 拖尾峰:

1)色譜柱被污染,更換新的色譜柱。

2)進(jìn)樣量過大,減少進(jìn)樣量。

3)流動相配比不合理,用合理的配比制造流動相。

4)流動相流速不合理,合理調(diào)節(jié)流動相流速。

5)色譜柱選擇不合理,選擇合適的色譜柱。

6)樣品不純,對樣品進(jìn)行純化。

 伸舌峰:

1)柱溫過低,合理調(diào)節(jié)柱溫。

2)溶劑并非流動相,用流動相溶解樣品。

3)流動相配比不合理,用合理的配比樹造流動相。

4)流動相流速不合理,合理調(diào)節(jié)流動相流速。



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